Composants typiques d'unmicroscope à fluorescencesont:
Colorants fluorescents (fluorophores)
Un fluorophore est un composé fluorescent qui émet à nouveau de la lumière lorsqu'il est excité par la lumière.
Les fluorophores contiennent généralement plusieurs groupes aromatiques liés ou sont des molécules planes ou cycliques avec plusieurs liaisons π.
De nombreux colorants fluorescents ont été conçus pour de nombreuses biomolécules.
Certaines d’entre elles sont de petites molécules intrinsèquement fluorescentes qui se lient à la biomolécule d’intérêt. Les principaux exemples en sont les colorants d'acide nucléique tels que le DAPI et le Hoechst, la phalloïdine, qui sont utilisés pour colorer les fibres d'actine dans les cellules de mammifères.
Source de lumière
Quatre principaux types de sources lumineuses sont utilisés, notamment les lampes à arc au xénon ou les lampes au mercure avec filtres d'excitation, les lasers et les LED haute puissance.
Les lasers sont principalement utilisés dans les techniques sophistiquées de microscopie à fluorescence, tandis que les lampes au xénon, les lampes au mercure et les LED avec filtres d'excitation dichroïque sont couramment utilisées en microscopie à fluorescence à grand champ.
Filtre d'excitation
L'excitateur est généralement un filtre passe-bande qui laisse passer uniquement les longueurs d'onde absorbées par le fluorophore, minimisant ainsi l'excitation provenant d'autres sources fluorescentes et bloquant la lumière d'excitation dans la bande d'émission de fluorescence.
miroir dichroïque
Un filtre dichroïque ou filtre à couche mince est un filtre coloré très précis utilisé pour réfléchir sélectivement la lumière dans une petite gamme de couleurs tout en réfléchissant d'autres couleurs.
Filtre d'émission.
L'émetteur est généralement un filtre passe-bande qui laisse passer uniquement la longueur d'onde émise par le fluorophore et bloque toute lumière indésirable en dehors de cette bande, notamment la lumière d'excitation.
Les filtres garantissent un arrière-plan minimal en filtrant l'énergie d'excitation indésirable (y compris les UV et les IR) ou l'autofluorescence des échantillons et du système.
