Un bienmicroscopedoit avoir trois caractéristiques :
Bonne résolution : la capacité de résolution fait référence à la capacité de produire des images distinctes d'objets rapprochés afin qu'ils puissent être distingués comme deux entités distinctes. Résolution:
Environ 0,2 mm (200 μm) à l'œil nu
Le microscope optique mesure environ 0,2 μm
La microscopie électronique mesure environ 0,5 nm
. La résolution dépend de l'indice de réfraction. Le pétrole a un indice de réfraction plus élevé que l'air.
Bon contraste : peut être encore amélioré en colorant l’échantillon.
Bon grossissement : Ceci est obtenu grâce à l’utilisation de lentilles concaves.
Fond clair ou microscopie optique
La microscopie en fond clair ou lumière produit des images sombres sur un fond plus clair.
microscopie à fond noir
Principe : En microscopie à fond noir, les objets apparaissent clairs sur un fond sombre. Ceci peut être réalisé en utilisant des condenseurs spéciaux à fond noir.
Applications : Utilisé pour identifier les cellules viables et non colorées et les bactéries minces telles que les spirochètes qui ne peuvent pas être observées en microscopie optique.
microscope à contraste de phase
Il visualise les cellules vivantes en créant des différences de contraste entre les cellules et l'eau. Il convertit les différences subtiles d’indice de réfraction et de densité cellulaire en changements d’intensité lumineuse facilement détectables.
Utile pour étudier :
mouvement microbien
Déterminer la forme des cellules vivantes
Détectez les composants bactériens tels que les endospores et les corps d’inclusion.
Microscope à fluorescence
Comment ça marche : Lorsque les colorants fluorescents sont exposés à la lumière ultraviolette (UV), ils sont excités et deviennent fluorescents, c'est-à-dire qu'ils convertissent ce rayon invisible de courte longueur d'onde en une lumière de plus longue longueur d'onde (lumière visible).
Applications : La microscopie à épifluorescence a les applications suivantes :
Autofluorescence lorsqu'il est placé sous une lumière UV, comme la cyclosporine
Micro-organismes recouverts de colorants fluorescents, tels que l'orange atriol pour les parasites du paludisme (QBC) et l'aurinol pour Mycobacterium tuberculosis.
Immunofluorescence : elle utilise des anticorps marqués avec des colorants fluorescents pour détecter les antigènes de surface cellulaire ou les anticorps qui se lient aux antigènes de surface cellulaire. Il en existe trois types : la FI directe, la FI indirecte et la cytométrie en flux.
microscope électronique
Elle a été inventée par Ernst Ruska en 1931. Elle diffère de la microscopie optique d'une manière différente.
Il existe deux types de ME :
Transmission EM (type MC, examine la structure interne, résolution 0,5 nm, donne une vue bidimensionnelle)
Scanning EM (examine la surface avec une résolution de 7 nm, offrant une vue 3D)
Principes de la microscopie électronique à transmission
Préparation des échantillons : effectuez les étapes suivantes sur les cellules pour préparer des échantillons très fins (20 à 100 nm d'épaisseur)
Fixation : Fixez les cellules à l’aide de glutaraldéhyde ou de tétroxyde pour les stabiliser.
Déshydratation : L'échantillon est ensuite déshydraté à l'aide d'un solvant organique tel que l'acétone ou l'éthanol.
Enrobage : l'échantillon est noyé dans un polymère plastique qui durcit ensuite pour former une masse solide. La plupart des polymères plastiques sont insolubles dans l'eau. Par conséquent, les échantillons doivent être complètement déshydratés avant d’être incorporés.
Coupe : L'échantillon est ensuite découpé en fines coupes avec un ultramicrotome et les coupes sont montées sur des lames métalliques (cuivre).
Technique de congélation : Il s’agit d’une méthode alternative pour visualiser les organites à l’intérieur des cellules pour la préparation des échantillons.
Les cellules sont rapidement congelées, puis chauffées → rompues à l'aide d'un couteau pour exposer les organites internes → sublimées → recouvertes de revêtements de platine et de carbone.
Les mesures visant à améliorer le contraste EM comprennent :
Coloration avec des solutions de sels de métaux lourds tels que le citrate de plomb et l'acétate d'uranyle
Coloration négative avec des métaux lourds tels que l'acide phosphotungstique ou l'acétate d'uranyle.
Ombrage : L'échantillon est recouvert d'un mince film de platine ou d'un autre métal lourd à un angle de 45 degrés afin que le métal n'atteigne les micro-organismes que d'un seul côté.
