C'est un omicroscope optiquedans lequel de petites déviations de lumière, ou déphasages, se produisent lors de la pénétration de la lumière dans un échantillon non coloré. Ces déphasages se traduisent en image, ce qui signifie que lorsque la lumière traverse un échantillon opaque, le déphasage éclaircit l'échantillon, créant une image éclairée (lumineuse) en arrière-plan.
La microscopie à contraste de phase produit des images très contrastées lorsque l'on travaille avec des échantillons transparents, ce qui est particulièrement vrai pour les images de cultures microbiennes, de fragments de tissus minces, de tissus cellulaires et de particules subcellulaires.
Le principe de fonctionnement de la microscopie à contraste de phase consiste à utiliser des méthodes optiques pour convertir l'échantillon en une image d'amplitude, qui est visualisée à travers les oculaires du microscope.
Le PCM peut être utilisé pour visualiser des cellules non colorées (également appelées objets de phase), ce qui signifie que la morphologie des cellules est conservée et que les cellules peuvent être observées dans leur état naturel, avec un contraste élevé et une clarté efficace. En effet, si les échantillons sont colorés et fixés, ils tueront la plupart des cellules, une caractéristique que la microscopie optique en fond clair ne peut pas éliminer.
Les décalages qui se produisent lors de la pénétration de la lumière sont convertis en changements d'amplitude, provoquant un contraste de l'image.
Combinés à des éléments améliorant le contraste (tels que la fluorescence), ils permettent une meilleure présentation des images d'échantillons.
Parties du microscope à contraste de phase
L'instrumentation d'un microscope à contraste de phase est basée sur le trajet de la lumière depuis la réception d'une source lumineuse jusqu'à la visualisation de l'image.
Sa séquence consiste donc en :
Source lumineuse (lampe à arc au mercure)
photo de groupe
ouverture
condenseur
Condenseur à anneau
spécimen
But
plaque photo
lumière polarisée
anneau de phase
Caractéristiques du microscope à contraste de phase
Le changement provoqué par la lumière diffusée (déviée) et la lumière non déviée qui atteint l'échantillon où elle est absorbée est produit à une certaine longueur d'onde et crée la couleur. La différence causée par la lumière diffusée et la lumière absorbée est appelée changement d’amplitude. Ces changements d'amplitude sont sensibles et ne peuvent donc pas être visualisés par un équipement photographique tel que la microscopie à contraste de phase et sont donc visibles à l'œil humain.
Le condenseur d'un microscope à contraste de phase possède un disque opaque appelé anneau, tandis que l'anneau transparent crée un cône de lumière qui traverse l'échantillon. À mesure que la lumière change, une partie de la lumière sur l’échantillon est courbée en raison des changements de densité optique, formant ainsi une image sur l’objectif. La lumière non déviée atteindra les anneaux de phase sur la plaque de phase, tandis que la lumière déviée manquera les anneaux de phase qui traversent directement la plaque de phase, formant ainsi une image.
Les microscopes à contraste de phase sont conçus avec des objectifs qui peuvent remplir diverses fonctions lorsqu'ils sont utilisés conjointement avec des techniques d'amélioration du contraste telles que la fluorescence. L'objectif est situé dans une plaque de phase interne, qui modifie son absorption de la lumière et son déphasage (c'est-à-dire non diffracté), créant un large spectre pour contraster l'échantillon et créer un fort contraste en arrière-plan.
Applications de la microscopie à contraste de phase
Déterminer la morphologie des cellules vivantes, telles que les cellules animales et végétales
Étudier la motilité et la structure du mouvement des micro-organismes
Détection de certains éléments microbiens comme les endospores bactériennes
