Applications de la microscopie à fluorescence

Identifiez les structures dans des échantillons biologiques fixes et vivants.
Microscopie à fluorescenceest aujourd'hui un outil courant dans la recherche en sciences de la vie car il permet l'utilisation de la coloration multicolore, le marquage des structures intracellulaires et la mesure des états physiologiques cellulaires.
Avantages de la microscopie à fluorescence
La microscopie à fluorescence est la méthode la plus populaire pour étudier les comportements dynamiques présentés en imagerie de cellules vivantes.
Cela découle de sa capacité à séparer des protéines individuelles avec une spécificité élevée dans des matériaux non fluorescents.
La sensibilité est suffisamment élevée pour détecter jusqu'à 50 molécules par micron cube.
Différentes molécules peuvent désormais être colorées avec différentes couleurs, permettant ainsi de suivre simultanément plusieurs types de molécules.
Ces facteurs se combinent pour conférer à la microscopie à fluorescence des avantages distincts par rapport aux autres techniques d’imagerie optique pour l’imagerie in vitro et in vivo.
Limites de la microscopie à fluorescence
Les fluorophores perdent leur capacité à émettre une fluorescence lorsqu'ils sont éclairés selon un processus appelé « photoblanchiment ». Le photoblanchiment se produit lorsque des molécules fluorescentes accumulent des dommages chimiques dus à l’accumulation d’électrons excités pendant le processus de fluorescence.
Les cellules sont sensibles aux effets phototoxiques, en particulier à la lumière de courte longueur d’onde. De plus, les molécules fluorescentes ont tendance à produire des produits chimiques réactifs lorsqu’elles sont exposées à la lumière, renforçant ainsi les effets phototoxiques.
Contrairement aux techniques de microscopie à transmission et à réflexion, la microscopie à fluorescence ne peut observer que des structures spécifiques marquées par fluorescence.