Définition de la microscopie à contraste de phase
Les cellules vivantes non colorées n’absorbent presque pas de lumière. Une mauvaise absorption de la lumière entraîne de très petites différences dans la distribution de l’intensité de l’image. Cela rend les cellules à peine ou non visibles en microscopie à fond clair. La microscopie à contraste de phase est une technique de microscopie optique qui convertit les déphasages de la lumière traversant des échantillons transparents en changements de luminosité dans l'image.
Il a été décrit pour la première fois en 1934 par le physicien néerlandais Frits Zernikes.
Principes de la microscopie à contraste de phase
Lorsque la lumière traverse les cellules, un petit déphasage se produit, invisible à l’œil humain. En microscopie à contraste de phase, ces déphasages sont convertis en changements d'amplitude et des différences de contraste d'image peuvent être observées.
Fonctionnement de la microscopie à contraste de phase
L'éclairage partiellement cohérent produit par une lampe tungstène-halogène est dirigé à travers un miroir collecteur et focalisé sur un anneau dédié (anneau de condenseur étiqueté) situé dans le plan focal avant du condenseur du sous-étage.
Le front d'onde traversant l'espace annulaire illumine l'échantillon et n'est ni dévié ni diffracté en phase ni retardé par la structure et les gradients de phase présents dans l'échantillon.
La lumière non diffractée et diffractée collectée par l'objectif est isolée par la lame de phase au niveau du plan focal arrière et focalisée sur le plan d'image intermédiaire, formant ainsi l'image finale de contraste de phase observée dans l'oculaire.
